rProtein A/G Beads 4FF 预装柱

货号：YA2460

保存：2-8℃

纯化流程：

本产品分为两种应用：抗体纯化流程和免疫沉淀流程，免疫沉淀流程还分为直接法和间接法。下面操作就从这三个方面详细介绍。

1、Buffer 的准备

所用水和Buffer 在使用之前建议用 0.22µm 或 0.45µm 滤膜过滤。

结合/ 洗杂Buffer：0.15MNaCl，20mMNa₂HPO₄，pH7.0

洗脱Buffer： 0.1M 甘氨酸，pH3.0

中和液：1MTris-HCl pH8.5

交联Buffer： 0.2M 三乙醇胺，pH8.2

终止液：50mMTris，pH7.5

2、样品准备

上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值，可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。

样品在上样前建议离心或用 0.22µm 或 0.45µm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3、抗体纯化流程操作方法

1) 将 rProtein A/G Beads 装入合适的层析柱，层析用 5 倍柱体积的结合 Buffer 进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

2) 将样品加到平衡好的 rProtein A/G Beads 中（保证目的蛋白与 rProtein A Beads 充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。

3) 用 10-15 倍柱体积的洗杂 Buffer 进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4) 使用 5-10 倍柱体积的洗脱 Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

5) 依次使用 3 倍柱体积的结合Buffer 和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用 5 倍柱体积的 20%的乙醇平衡， 然后保存在等体积的 20%的乙醇中，置于 4 度保存，防止填料被细菌污染。

6)SDS-PAGE 检测将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE检测纯化效果。

4、 免疫沉淀直接法操作流程

4.1 抗体吸附

1) 取适量的 rProtein A/G Beads 加入到 2ml 离心管中，500 转离心 1min，吸弃上清。

2) 加入 0.5ml 结合 Buffer，悬浮填料（使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用），500 转离心 1min，吸弃上清。再重复两次。

3) 向步骤 2)平衡的填料中加入抗体溶液，悬浮填料，室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管，约 30min后，500 转离心 1min，收集上清液，留待检测。

4) 向 3)的填料中加入 0.5ml 的洗杂Buffer，悬浮填料，进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，500 转离心 TUNEology 波长可调检测卡盒-->